1.牛单B细胞技术原理
单个B细胞抗体技术是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术，基于流式细胞分选技术进行单B细胞单抗制备，利用每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性，从动物的淋巴组织中收集B细胞，通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因，从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群，然后选择抗体生产宿主，使其产生抗体[1] 。
牛单B细胞技术具体特异性强，批次间差异小等特点，由该方法制得的牛单克隆抗体是常用的单克隆抗体。目前，牛单B细胞技术制备的抗体在生物医学研究、诊断工具和治疗药物研发等方面有广泛应用[2]。
图1： 牛重组单克隆抗体制备（卡梅德生物科技（天津）有限公司）
2.牛单B细胞单抗制备流程
①动物免疫、PBMC分离。选择牛作为实验动物，并通过注射目标抗原（通常是目标蛋白或多肽）来激发免疫反应，免疫牛4-5次，以此激活牛的免疫系统，导致B细胞产生抗体。然后进行ELISA效价测定、免疫牛外周血采集和PBMC分离。
②流式分选。用PBMC流式分选方法来分选抗原特异性的单个B细胞。
③单B细胞培养筛选。将分选的单个B细胞先在体外进行5~20板96孔板单B细胞培养，然后将细胞培养的上清进行ELISA筛选或者FACS等前期介入检测。
④阳性克隆测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR，来扩增其抗体可变区基因，然后进行测序。
⑤载体构建、抗体表达纯化。最后进行抗体的哺乳表达载体构建、细胞转染和ELISA验证。
图2：牛单B细胞技术抗体制备流程图（卡梅德生物科技（天津）有限公司）
3.单B细胞单抗制备优势
类目 | 单B细胞技术 | 杂交瘤技术 | 噬菌体展示技术 |
抗体 | 天然 | 天然 | 非天然 |
抗体亲和力 | 高 | 高 | 中等 |
可成药性 | 高 | 高 | 低 |
时间 | 16～20周，可选快速免疫 | 20～26周，可选快速免疫 | 16～20周，可选快速免疫 |
抗体基因序列 | 直接获得 | 需要进一步测序 | 直接获得 |
抗体多样性 | 高 | 中等 | 中等 |
所能筛选的种属 | 不限种属 | 牛、兔 | 不限种属 |
单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体，直接获取完整的单一来源抗体，该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性，并且能够直接获得抗体基因序列[3] 。
4.牛单B细胞应用
牛单B细胞技术制备的抗体通常广泛应用于以下4个方面：
①药物研发。牛单B细胞技术制备的抗体能够被用于新药物的研发，尤其是在癌症治疗领域具有极大的应用前景。
②疫苗研制。牛单B细胞技术制备的抗体能够被用于提高疫苗的效力和特异性。
③免疫疗法。使用牛单B细胞技术制备的抗体可以用于免疫治疗，能够为消费者提供更加个性化的治疗。
④基础医学研究。抗体具有特异性和多样性，能够用于解析生物学过程和疾病机制。
5. 卡梅德生物能提供的服务及优势
卡梅德生物拥有丰富的经验积累、严格的质控体系，提供的单B细胞单抗制备服务的周期短、不限种属、可获得抗体序列，得到的抗体具有更高的特异性和亲和力。为了满足客户的不同需求，卡梅德生物能够提供从抗原设计，合成与修饰，到动物免疫，噬菌体文库构建与筛选，下游抗体修饰与应用鉴定等一站式技术服务。
参考文献
[1] Tan S H , Young D , Elsamanoudi S ,et al.Abstract 2565: Detection of ETV1 expression in human prostate tissue specimens using a novel and highly specific rabbit monoclonal antibody[C]//Proceedings: AACR Annual Meeting 2021; April 10-15, 2021 and May 17-21, 2021; Philadelphia, PA.2021.DOI:10.1158/1538-7445.AM2021-2565.
[2] Wallace J L , Arfors K E , Mcknight G W .A monoclonal antibody against the CD18 leukocyte adhesion molecule prevents indomethacin-induced gastric damage in the rabbit[J].Gastroenterology, 1991, 100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.
[3] Powell, William C ,Hicks,et al.A new rabbit monoclonal antibody (4B5) for the immunohistochemical (IHC) determination of the HER2 status in breast cancer: comparison with CB11, fluorescence in situ hybridization (FISH), and interlaboratory reproducibility.[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2008, 15(5):510-1.DOI:10.1097/PAI.0b013e31802ced25.