哺乳动物细胞的培养条件37℃ 5-7%二氧化碳和高湿度
不要将培养板堆叠的很高——可能会倒塌或导致底层培养板无法充分交换气体
有些实验室使用培养基或试剂前会将其预热至37℃ 10-20分钟(取决于体积)
切勿将试剂水浴过长时间-过度升温会导致L-谷氨酰胺降解,胰蛋白酶溶液的活性丧失
水浴加热——保持瓶身直立使瓶颈露出水面
超净台:1.使用前后用70%乙醇擦拭超净台
2.超净台中放置的每个物品都应喷洒70%乙醇并擦拭干净
小心转移细胞,使用不透气培养瓶在培养箱中拿出之前拧紧瓶盖
每天显微镜下观察培养的细胞——检查细胞的健康和生长,是否存在污染(污染类别主要是细菌和真菌污染做好规范化操作不会污染)
多说一下,黑胶虫污染(黑点点做无规则运动-布朗运动,主要是在最高倍镜下观察到的)是由血清污染的需更换血清,我一般的细胞系使用生工血清,原代细胞使用sigma的血清。
这个是大概的细胞量具体还需要细胞计数这个只是一个大概的。
无菌操作:
通过采用前进的方式让手进入超净台—不要扫掠前部并干扰气流,确保工作台表面不要过于拥挤
工作时,需要将超净台的前屏拉到低位,避免在无菌物体上方交叉物品和双手,仅可在超净台打开培养基、试剂和物品。手握盖子时,请勿触碰内缘或将盖子放在一旁,需内表面朝下放置。
完成实验后,确保所有物品都被盖紧后再从超净台中取出(最好用封口膜封住)
离开之前使用75%乙醇擦拭工作台表面并清理超净台后在离开(防止配液在超净台中留下痕迹很丑的!!!!!)
细胞传代:细胞达到80%-90%可以开始
接种一段时间后会产生一段指数增长时期,保持细胞指数期增殖——产生最多数量的健康细胞
当细胞覆盖了平板或在细胞密度超出培养基的容量之后应进行传代(如果复苏细胞到达70-80%左
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