胎牛血清是细胞培养中重要的天然培养基。它是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段,血中含有丰富的生长发育因子,非常适合各种细胞的培养。因此,如何在使用过程中保护这些因子的活性,达到最大的细胞培养效果,就需要正确地使用胎牛血清。那么,你知道正确的胎牛血清的使用方法吗?
正确的胎牛血清的使用方法可分为以下四个方面:
- 正确储存,避免反复冻融:
- 血清在-20°C冻存。
- 血清避免反复冻融,以免降低因子活性。如一次用不完,应进行分装。
- 血清和培养基应尽可能“现用现配”,配好的培养液,应于一周内用完。
- 血清避免在4°C或更高温度静置过久,否则会破坏血清中有效活性成分,影响血清品质。
- 正确的融化:
国际上流行的【血清融化三步法】可最大限度地保存血清中因子的活性,不会产生沉淀,同时能缩短血清融化时间。具体如下:
操作 | 温度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
第一步 | 室温 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
第二步 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
第三步 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |
- 关于胎牛血清的灭活:
真正的胎牛血清因为胎牛没有形成有效补体,如果针对补体灭活的话,就不需要。其他情况根据实验设计来决定。
- 正确控制胎牛血清的浓度:
胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基础培养基中,混合后配成完全培养基。
曾有文献报道,不同胎牛血清浓度对细胞存在一定的影响,尤其是干细胞和原代细胞。具体最佳浓度需要用户根据自己的实验来确定,以既保证培养的效果,又避免血清的浪费。
胎牛血清是一种常用的细胞培养基本组分,广泛应用于生物医学领域。在进行细胞培养时,正确的胎牛血清的使用方法可以有效提高细胞培养的成功率和细胞的健康状态。首先,准备培养皿和所需培养液,将培养皿放入无菌工作台中。然后,向培养皿中加入适量的培养液,并注意避免产生气泡。接着,加入适量的胎牛血清,注意不要加入过多以免影响细胞的生长。最后,将细胞悬液加入培养皿中,将其放入培养箱中进行培养。
以上是关于胎牛血清的使用方法的论述,欢迎大家留言讨论。
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