普通显微镜成像与共聚焦显微镜成像?
1、开机顺序:1→2→3→4→5→6→7
①②——控制器,通电电源
③——激光器开关(转动钥匙)
④——汞灯电源(开关间隔 30min以上)
金属卤化物灯“X-cite 120”
金属卤化物灯“HXP 120”
⑤——显微镜开关
⑥——载物台开关
⑦——电脑开关
2、软件名称:ZEN
启动ZEN软件(Blue),选择“ZEN system”
启动ZEN软件(Blue),选择“ZEN system”
Image Processing——图像处理,拷数据
ZEN System——拍照
打开之后 Initializing Hardware 硬件初始化,检测电脑跟显微镜是否连上。
报错“The Stogeand focsarenotyetcolibrated”,一般直接点“Skip Calibration”。
3、左边 Locate~定位
用眼睛观察,找视野
BF——明场
488——绿色,常见GFP、YFP、FITC
DAPI—— 蓝色,细胞核
RHE——红色,RFP,mCherry
4、Acquisition~图像获取,拍照
点 Smart Setup“智能设置”弹出一个对话框,点“+”添加标记的荧光染料/探针/荧光蛋白,找到之后双击加进列表。
三种拍摄方式:
A、Fastest
拍摄速度最快, 发射波长接近的荧光染料间存在串色现象;
B、Best signal
拍摄速度最慢; 基本避免了发射荧光的串色;
C、Smartest(Line)
结合上述两者优势,减少串色的同时拍摄速度较快,但是光路中硬件设置不能改变。
三种拍照方式中“Best Signal”是最常用的,速度比较慢,但效果最好。
5、整个操作界面在左边两列
(1)最左边这列“Imaging Setup”是光路图;
(2)右边这列“Acquisition Parameter”是需要调节的参数。其中“Acquisition Mode”拍照,“channels”通道设置图像亮度、信噪比和分辨率。
·“Channels”里面有刚添加的三个通道,选择任意一个通道,左边的光路可进行自动切换,因此一般不需要再自己进行修改光路。除非液流体的自发荧光或者一些有串色风险的,可以手动拖动接收范围。
标签:拍照,显微镜,串色,ZEN,开关,蔡司,荧光 From: https://www.cnblogs.com/ybqjymy/p/17514527.html